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Prestaciones Servicio de Análisis de Ácidos Nucleicos

 

• Secuenciación de ADN.
El servicio de Secuenciación de ADN de la Universidad del Almería (SSA) está actualmente equipado con un analizador genético capilar AB 3500 (Life Technologies) y un equipo de secuencición masiva Ion PGM (Personal Genome Machine). En las reacciones se utiliza el kit Big Dye Terminator versión 3.1, realizándose el análisis en capilares largos que permiten la obtención de secuencias de unos 900 nucleótidos. Las muestras de ADN pueden ser plásmidos o fragmentos de ADN obtenidos mediante PCR. Para la secuenciación se pueden utilizar los cebadores universales disponibles en el servicio o cebadores específicos suministrados por el usuario.
El servicio dispone de los siguientes cebadores de secuenciación:
• Universal (M13 forward –21)
• Reverse (M13 reverse -24)

Asimismo, se puede utilizar cualquier cebador específico suministrado por el usuario.
Modalidades.
• Solo electroforesis:
• A partir de ADN:
• A partir de cultivos:
• A partir de un producto de PCR “crudo”:

• Análisis de fragmentos.
El análisis se lleva a cabo con el analizador genético AB 3500, y en él se desarrolla la separación y comparación de fragmentos de ADN basada en tamaño, con múltiples aplicaciones en el estudio de marcadores moleculares de tipo microsatélites, AFLPs, STRs, VNTRs, etc.

• RT-PCR.
El servicio de PCR a “tiempo real” está equipado con un 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems) y permite el seguimiento de la reacción de PCR tanto con SYBRGreen como con Sondas Taqman®.

• Aislamiento y cuantificación de ADN plasmídico.
El aislamiento del plásmido es llevado a cabo mediante kits comerciales, mientras que la cuentificación se realiza por comparación con patrones de concentración conocida en geles de agarosa, o mediante métodos espectrofotométricos.

• Purificación y cuantificación de productos de PCR.
La purificación se lleva a cabo mediante columnas específicas, y la cuantificación, en geles de agarosa.

• Electroforesis de ADN en geles de agarosa.
Tras la correspondiente electroforesis en gel de agarosa, el servicio reenvía al usuario una fotografía en soporte electrónico (formato JPG).

• PCR.
El usuario puede usar los oligonucleótidos cebadores disponibles en el Servicio de Secuenciación (Universal y Reverse), o puede utilizar cualquier cebador específico suministrado por él mismo siempre que tengan unas características determinadas.

• Uso del liofilizador.
El liofilizador usado por el servicio de análisis de ácidos nucleicos es el CRYODOS V3.1-50, que alcanza una temperatura mínima de –50 ºC y una presión mínima de 0.050 mb.
 

Actualizado por: Servicios Centrales de Investigación

Fecha: 6 de mayo de 2013

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